Con la tesis “Identificación y Caracterización de Genes Asociados a Resistencia Antibiótica en el Cromosoma y Plásmidos de Cepas de Piscrickettsia salmonis”, Daniela Mansilla, se tituló de Tecnología Médica de la Universidad Austral de Chile (UACH).
“El objetivo de mi tesis es la identificación de genes putativos de resistencia antibiótica en los plásmidos de P. salmonis y evaluar su expresión. En el estudio se identificaron 2 genes putativos (tet41 y MDR) y se usaron como control 2 genes cromosomales (tetE y Bcr). Debido al gran tamaño de los plásmidos que posee P. salmonis, se diseñó un protocolo de extracción de DNA plasmidial de dos etapas, que ayudara a diferenciar su localización in vitro: Extracción por kit de pDNA, y extracción de las bandas plasmidiales desde gel de agarosa de bajo punto de fusión (agarosa low-melting), beta-agarasa e ioduro de sodio (NaI), tras lo cual se efectuó run PCR convencional para lograr diferenciar los genes plasmidiales de los cromosomales”, detalló la nueva profesional titulada bajo el alero de la línea de investigación “Salud Animal en Ambiente Marino” (RP3), del Centro INCAR.
Para el estudio de expresión génica por RT-qPCR, se realizó una cinética de exposición antibiótica utilizando concentraciones subletales de Oxitetraciclina y Florfenicol, realizaron extracciones a las 0, 2, 4 y 6 horas post tratamiento (hpt).
De acuerdo a Daniela Mansilla, se logró utilizar el protocolo de extracción diseñado para lograr diferenciar los genes plasmidiales (que mantienen amplificación) de los cromosomales (que no presentan amplificación con este protocolo).
“Además, en los estudios de expresión génica, se destacó la activación significativa de los genes tet41 (plasmidial) a las 6 hpt con Oxitetraciclina y tetE (cromosomal) a las 4 htp; ambos genes con una expresión génica equivalente entre las 4 y 6 horas post tratamiento”, explicó.
“La investigación permite dar relevancia al estudio de los plásmidos de P. salmonis en cuanto las interacciones de éste con otros microorganismos acuáticos con los que comparte nicho ecológico. Además, incentiva el estudio de elementos génicos móviles que podrían estar participando en eventos de resistencia antibiótica en patógenos de peces que afectan a la acuicultura chilena”, destacó la nueva profesional.
Durante el desarrollo de su tesis, la nueva profesional tuvo agradeció al equipo del Laboratorio de Biología Molecular de Peces de la UACH, como a sus profesores: el Investigador Principal de la RP3, Dr. Jaime Figueroa, y a la Dra. Denise Hausmann, por su apoyo y guía.
El examen de grado se rindió el viernes 03 de julio, vía zoom.
